← Артқа
Г. Тұщы су жасыл микробалдырларына арналған орталар
WCWC (Guillard's Freshwater medium)
f/2-нің тұщы су баламасы
- Қолданылуы
- Тұщы су диатомды, жасыл, алтын түсті және криптофитті микробалдырлары; CCMP коллекциясы
- pH
- 7,2–7,6
- Дереккөз
- Guillard & Lorenzen, 1972
Құрамы
| Компонент | 1 л-ге мөлшері |
|---|---|
| NaNO₃ | 85,01 мг |
| CaCl₂·2H₂O | 36,76 мг |
| MgSO₄·7H₂O | 36,97 мг |
| NaHCO₃ | 12,60 мг |
| K₂HPO₄ | 8,71 мг |
| Na₂SiO₃·9H₂O | 28,42 мг |
| Трис (Tris) | 500 мг (немесе HEPES 2,38 г) |
| f/2 микроэлементтер ерітіндісі | 1,0 мл |
| Витаминдер ерітіндісі | 0,5 мл |
| Дистилденген су | 1000 мл-ге дейін |
f/2 микроэлементтер ерітіндісі (Гиллард бойынша) — жұмыс ерітіндісі
100 мл ерітіндіге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау 4 °C, 12 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Na₂ЭДТА·2H₂O | 436 мг |
| FeCl₃·6H₂O | 315 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 18,0 мг (немесе № 1 бастапқы ерітіндіден 1 мл) |
| № 2 бастапқы ерітінді (ZnSO₄) | 1 мл |
| № 3 бастапқы ерітінді (CoCl₂) | 1 мл |
| № 4 бастапқы ерітінді (CuSO₄) | 1 мл |
| № 5 бастапқы ерітінді (Na₂MoO₄) | 1 мл |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
f/2 микроэлементтерінің бастапқы ерітінділері (әрқайсысы бөлек дайындалады)
әрқайсысы 100 мл-ге · жұмыс ерітіндісінің 100 мл-іне әрқайсысынан 1 мл-ден алынады · сақтау 4 °C, 12 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| № 1 — MnCl₂·4H₂O | 100 мл-ге 1,80 г |
| № 2 — ZnSO₄·7H₂O | 100 мл-ге 0,220 г |
| № 3 — CoCl₂·6H₂O | 100 мл-ге 0,100 г |
| № 4 — CuSO₄·5H₂O | 100 мл-ге 0,098 г |
| № 5 — Na₂MoO₄·2H₂O | 100 мл-ге 0,063 г |
Витаминдер ерітіндісі (f/2 стандартты рецептурасы) — жұмыс ерітіндісі
100 мл ерітіндіге · 1 л ортаға 0,5 мл шығыны · сақтау −20 °C, 1–2 мл аликвоталармен, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Тиамин·HCl (витамин B₁) | 20 мг |
| Биотиннің бастапқы ерітіндісі | 1 мл |
| B₁₂ бастапқы ерітіндісі | 1 мл |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
Витаминдердің бастапқы ерітінділері (бөлек дайындалады)
әрқайсысы 100 мл-ге · жұмыс ерітіндісінің 100 мл-іне әрқайсысынан 1 мл-ден алынады · сақтау −20 °C, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Биотин (витамин H) | 100 мл-ге 10 мг |
| Цианокобаламин (витамин B₁₂) | 100 мл-ге 10 мг |
Дайындау
NaNO₃ еріту → MgSO₄·7H₂O → K₂HPO₄ → NaHCO₃ → Tris → микроэлементтер ерітіндісінен 1 мл → CaCl₂·2H₂O → pH-ты 7,2–7,6-ға дейін жеткізу → соңғы болып Na₂SiO₃·9H₂O енгізу → 1000 мл-ге дейін толтыру → автоклавтау → суыған ортаға витаминдер ерітіндісінен 0,5 мл стерильді енгізу.
Ескертулер
- Силикат соңғы болып және тек pH-ы белгіленіп қойылған ортаға енгізіледі — әйтпесе аморфты SiO₂ тұнбаға түседі. Диатомды емес дақылдар үшін Na₂SiO₃ алынып тасталады.
- Витаминдер автоклавтап, суытқаннан кейін стерильді сүзу арқылы енгізіледі.
- Tris-сіз нұсқа CO₂ беріле отырып өсірілгенде қолданылады: онда буфер қажет емес әрі карбонаттық жүйені бақылауға кедергі келтіреді.
- Реті: алдымен Na₂ЭДТА ерітіледі, содан кейін FeCl₃ (мольдік қатынасы ≈ 1:1, ерітінді сары-сабан түске енеді), одан соң әр бастапқы ерітіндіден 1 мл-ден қосылады. Микроэлементтер дәл осы бастапқы ерітінділерден енгізіледі — 0,6–2 мг-ды дәл өлшеу мүмкін емес.
- Бес ерітінді анық таңбаланған жеке құтыларда дайындалып, сақталады. Оларды жұмыс ерітіндісіне енгізгенге дейін бір-бірімен араластыруға болмайды.
- Витаминдерді автоклавтауға БОЛМАЙДЫ — тек 0,22 мкм мембрана арқылы стерильді сүзу. Тиамин 121 °C-та 40–70 %-ға ыдырайды және қыздырусыз да pH 8-ден жоғары болғанда деградацияға ұшырайды, сондықтан витаминдер суыған ортаға егу алдында бірден енгізіледі. Аликвоталарды қайта мұздатуға болмайды.
- Биотин суық суда нашар ериді — оны 1 мл 50 % этанолда немесе pH 8 болғанда жылы суда ерітеді, содан кейін көлемін жеткізеді. B₁₂ ерітіндісінің тән қызғылт-қызыл түсі болады; түссізденуі витаминнің ыдырағанын білдіреді.