← Назад
Е. Среды для галофильных и специализированных культур
JOHNSONСреда Джонсона (Johnson) для Dunaliella
Гипергалинная среда
- Применение
- Dunaliella salina, D. bardawil, D. viridis — накопление β-каротина и глицерина
- pH
- 7,5 (для каротиногенеза 7,0–7,5)
- Источник
- Johnson et al., 1968; Borowitzka & Borowitzka, 1988
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| NaCl | 87,7 г (1,5 М); диапазон 29–234 г (0,5–4 М) |
| MgCl₂·6H₂O | 1,5 г |
| MgSO₄·7H₂O | 0,5 г |
| KCl | 0,2 г |
| CaCl₂·2H₂O | 0,2 г |
| KNO₃ | 1,0 г (или NaNO₃ 0,84 г) |
| NaHCO₃ | 0,043 г |
| KH₂PO₄ | 0,035 г |
| FeCl₃·6H₂O | 1,45 мг |
| Na₂ЭДТА | 189 мг |
| Раствор микроэлементов Джонсона | 1,0 мл |
| Дистиллированная вода | до 1000 мл |
Раствор микроэлементов для среды Джонсона
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| H₃BO₃ | 61,0 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 41,0 мг |
| Первичный раствор ZnCl₂ | 1 мл |
| Первичный раствор CuCl₂ | 1 мл |
| Первичный раствор молибдата | 1 мл |
| Первичный раствор CoCl₂ | 1 мл |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Первичные растворы для среды Джонсона (готовятся раздельно)
каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл · хранение 4 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| ZnCl₂ | 0,410 г на 100 мл |
| CuCl₂·2H₂O | 0,410 г на 100 мл |
| (NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O | 0,380 г на 100 мл |
| CoCl₂·6H₂O | 0,150 г на 100 мл |
Приготовление
Растворить NaCl в 700 мл воды → MgCl₂·6H₂O → MgSO₄·7H₂O → KCl → KNO₃ → KH₂PO₄ → отдельно приготовить комплекс FeCl₃ + Na₂ЭДТА и внести → 1 мл раствора микроэлементов → CaCl₂·2H₂O → в последнюю очередь NaHCO₃ → довести до 1000 мл → pH 7,5 → стерилизовать фильтрацией.
Примечания
- При высокой солёности среду стерилизуют ФИЛЬТРАЦИЕЙ: автоклавирование вызывает выпадение CaSO₄ и Mg(OH)₂, а также резкий сдвиг pH.
- Dunaliella лишена клеточной стенки. При разбавлении среды дистиллированной водой клетки мгновенно лизируют — все манипуляции (отмывка, разведение для счёта, пересев) проводят изоосмотическими растворами.
- Индукция каротиногенеза: повышение NaCl до 3–4 М, снижение азота в 5–10 раз и увеличение освещённости до 300–500 мкмоль фотонов·м⁻²·с⁻¹. Культура при этом меняет цвет с зелёного на оранжево-красный.
- Отношение Na₂ЭДТА к железу здесь необычно велико (189 мг против 1,45 мг FeCl₃·6H₂O): избыток хелатора связывает также тяжёлые металлы, токсичные при высокой ионной силе.
- В оригинальной прописи раствор в десять раз разбавленнее и вносится по 10 мл на литр среды. Здесь он приведён к общему для сборника расходу 1 мл/л — итоговые концентрации микроэлементов в среде идентичны оригинальным.
- Четыре раствора хранят в отдельных флаконах. ZnCl₂ гигроскопичен — навеску берут быстро, банку сразу закрывают.