Среда Castenholz D

Для термофильных цианобактерий

Применение: Thermosynechococcus, Synechococcus lividus, Chloroflexus, Mastigocladus laminosus — горячие источники (45–70 °C)
pH: 8,2 (вариант DH — 7,6–8,0)
Источник: Castenholz, 1969, 1988

Состав

Компонент	Количество на 1 л
Нитрилотриуксусная кислота (NTA)	100 мг
CaSO₄·2H₂O	60 мг
MgSO₄·7H₂O	100 мг
NaCl	8 мг
KNO₃	103 мг
NaNO₃	689 мг
Na₂HPO₄	111 мг
Раствор железа (Castenholz)	1,0 мл
Раствор микроэлементов по Ничу	1,0 мл
Дистиллированная вода	до 1000 мл

Раствор железа для среды Castenholz

на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 6 мес.

Компонент	Навеска / объём
FeCl₃·6H₂O	29 мг
Дистиллированная вода	до 100 мл

Раствор микроэлементов по Ничу (Nitsch)

на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 12 мес.

Компонент	Навеска / объём
H₃BO₃	50 мг
MnSO₄·H₂O	50 мг
ZnSO₄·7H₂O	5,0 мг
CuSO₄·5H₂O	2,5 мг (1 мл первичного р-ра 2,5 г/л)
Na₂MoO₄·2H₂O	2,5 мг (1 мл первичного р-ра 2,5 г/л)
CoCl₂·6H₂O	2,5 мг (1 мл первичного р-ра 2,5 г/л)
Дистиллированная вода	до 100 мл

Приготовление

Строго: NTA растворить первой → CaSO₄·2H₂O (растворяется медленно, перемешивать 10–15 мин) → MgSO₄·7H₂O → NaCl → KNO₃ → NaNO₃ → Na₂HPO₄ → 1 мл раствора железа → 1 мл раствора по Ничу → довести до 1000 мл → pH 8,2.

Примечания

Нарушение порядка внесения приводит к выпадению CaSO₄ и фосфата кальция: NTA должна быть в растворе ДО кальция, иначе хелатирование не работает.
Культивирование при 45–55 °C ведут в закрытых сосудах с водяным затвором — иначе испарение за неделю повышает солёность среды на 20–30 %.
Вариант DH (Castenholz D + HEPES или снижение pH) применяют для штаммов, чувствительных к высокой щёлочности.
ЭДТА в этот раствор не добавляют: хелатирование обеспечивает нитрилотриуксусная кислота (NTA), входящая в состав самой среды.
Три первичных раствора готовят по 250 мг на 100 мл и берут из каждого по 1 мл. Готовый раствор подкисляют 1 каплей конц. H₂SO₄ — это предотвращает выпадение гидроксидов при хранении.