BG-11₀ (BG-11 без азота)

Селективная среда для азотфиксирующих форм

Применение: Anabaena, Nostoc, Cylindrospermum, Calothrix, Aphanizomenon — гетероцистные и диазотрофные штаммы; индукция гетероцист
pH: 7,1
Источник: Rippka et al., 1979

Состав

Компонент	Количество на 1 л
NaNO₃	исключить полностью
K₂HPO₄·3H₂O	0,04 г
MgSO₄·7H₂O	0,075 г
CaCl₂·2H₂O	0,036 г
Лимонная кислота	0,006 г
Цитрат железа (ferric citrate)	0,006 г
Na₂ЭДТА	0,001 г
Na₂CO₃	0,020 г
Раствор микроэлементов A5 + Co	1,0 мл
Дистиллированная вода	до 1000 мл

Раствор микроэлементов A5 + Co

на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды (хватает на 100 л) · хранение 4 °C в тёмном стекле, 12 мес.

Компонент	Навеска / объём
H₃BO₃	286 мг
MnCl₂·4H₂O	181 мг
ZnSO₄·7H₂O	22,2 мг
Na₂MoO₄·2H₂O	39,0 мг
CuSO₄·5H₂O	7,9 мг
Co(NO₃)₂·6H₂O	4,94 мг (или 1 мл первичного р-ра 4,94 г/л)
Дистиллированная вода	до 100 мл

Приготовление

Порядок тот же, что и для BG-11, но NaNO₃ не вносят, а цитрат железа-аммония заменяют на цитрат железа. CaCl₂·2H₂O — последним.

Примечания

Ключевой момент: в безазотной среде НЕЛЬЗЯ оставлять цитрат железа-аммония — он содержит NH₄⁺ и среда перестаёт быть безазотной. Обязательная замена на цитрат железа (ferric citrate) или Fe-ЭДТА.
Перед посевом инокулят дважды отмывают в BG-11₀ центрифугированием (3000 g, 5 мин) для удаления остаточного нитрата — иначе гетероцисты не образуются и результат опыта недостоверен.
Вариант BG-11₀ + 2–5 мМ NaHCO₃ (0,17–0,42 г/л) применяют при культивировании без продувки CO₂.
Первые признаки перехода к азотфиксации — появление гетероцист через 18–36 ч и временное пожелтение культуры вследствие деградации фикобилисом.
Соли растворяют по одной, в указанном порядке; H₃BO₃ растворяется медленно — допускается подогрев до 40 °C. Кобальт вносят из первичного раствора: навеску 4,94 мг взвесить на обычных весах невозможно. Первичный раствор Co: 494 мг Co(NO₃)₂·6H₂O в 100 мл воды, взять 1 мл. Без кобальта раствор называется просто «A5». Появление осадка или помутнения — признак негодности.