← Назад
Е. Среды для галофильных и специализированных культур
BG-11-MODМодификации BG-11 для специальных задач
Варианты базовой среды под конкретные эксперименты
- Применение
- Синтетическая биология, накопление липидов, изучение лимитирования у Synechocystis и Synechococcus
- pH
- 7,5–8,0
- Источник
- Обобщённая практика на основе Rippka et al., 1979
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| Полный состав BG-11 | см. раздел А |
| NaHCO₃ (источник C без продувки) | 0,84–4,2 г (10–50 мМ) |
| HEPES-NaOH pH 7,5 (буфер) | 2,38 г (10 мМ) |
| Глюкоза (миксотрофия) | 1,0–5,0 г |
| Na₂S₂O₃·5H₂O (только для агара) | 0,3 г |
| Раствор микроэлементов A5 + Co | 1,0 мл |
| Дистиллированная вода | до 1000 мл |
Раствор микроэлементов A5 + Co
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды (хватает на 100 л) · хранение 4 °C в тёмном стекле, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| H₃BO₃ | 286 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 181 мг |
| ZnSO₄·7H₂O | 22,2 мг |
| Na₂MoO₄·2H₂O | 39,0 мг |
| CuSO₄·5H₂O | 7,9 мг |
| Co(NO₃)₂·6H₂O | 4,94 мг (или 1 мл первичного р-ра 4,94 г/л) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Приготовление
Базовую BG-11 готовят в обычном порядке (кальций — последним). Бикарбонат и HEPES вносят до автоклавирования; глюкозу стерилизуют отдельно фильтрацией и добавляют в остывшую среду.
Примечания
- BG-11 без фосфора (BG-11 –P): исключить K₂HPO₄; посевной материал дважды отмыть центрифугированием. Используется для изучения полифосфатных гранул.
- BG-11 без серы (BG-11 –S): MgSO₄·7H₂O заменить на MgCl₂·6H₂O 0,062 г/л (эквимолярно по магнию); сульфаты в растворе микроэлементов заменить на соответствующие хлориды.
- Глюкозу НЕЛЬЗЯ автоклавировать вместе со средой: происходит реакция Майяра с аминогруппами и образование токсичных для клеток продуктов; среда буреет.
- Na₂S₂O₃·5H₂O добавляют только в агаризованные среды — в жидкой среде он не нужен и может подавлять рост.
- Соли растворяют по одной, в указанном порядке; H₃BO₃ растворяется медленно — допускается подогрев до 40 °C. Кобальт вносят из первичного раствора: навеску 4,94 мг взвесить на обычных весах невозможно. Первичный раствор Co: 494 мг Co(NO₃)₂·6H₂O в 100 мл воды, взять 1 мл. Без кобальта раствор называется просто «A5». Появление осадка или помутнения — признак негодности.