← Назад
Г. Среды для пресноводных зелёных микроводорослей
3N-BBM-V3N-BBM + V
BBM с тройным азотом и витаминами
- Применение
- Требовательные штаммы зелёных микроводорослей, ауксотрофы по витаминам; стандарт коллекции CCAP
- pH
- 6,6
- Источник
- CCAP; модификация Bischoff & Bold
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| NaNO₃ | 0,75 г (×3 от BBM) |
| CaCl₂·2H₂O | 0,025 г |
| MgSO₄·7H₂O | 0,075 г |
| K₂HPO₄ | 0,075 г |
| KH₂PO₄ | 0,175 г |
| NaCl | 0,025 г |
| Раствор ЭДТА-KOH | 1,0 мл |
| Раствор железа (FeSO₄-H₂SO₄) | 1,0 мл |
| Раствор борной кислоты | 1,0 мл |
| Раствор микроэлементов BBM | 1,0 мл |
| Раствор тиамина (B₁) | 1,0 мл |
| Раствор цианокобаламина (B₁₂) | 1,0 мл |
| Дистиллированная вода | до 1000 мл |
Раствор ЭДТА-KOH для BBM
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Na₂ЭДТА | 5,0 г |
| KOH | 3,1 г |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор железа (FeSO₄-H₂SO₄) для BBM
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C в тёмном стекле, 2–3 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| FeSO₄·7H₂O | 498 мг |
| H₂SO₄ (конц.) | 0,1 мл (2 капли) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор борной кислоты для BBM
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| H₃BO₃ | 1,142 г |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор микроэлементов BBM (по Болду)
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| ZnSO₄·7H₂O | 882 мг |
| CuSO₄·5H₂O | 157 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 144 мг |
| MoO₃ | 71 мг (или Na₂MoO₄·2H₂O 119 мг) |
| Co(NO₃)₂·6H₂O | 49 мг |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор тиамина (B₁) для 3N-BBM + V
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение −20 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Тиамин·HCl | 1,2 мг (или 1 мл первичного р-ра 0,12 г/л) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор цианокобаламина (B₁₂) для 3N-BBM + V
на 100 мл · расход 1 мл на 1 л среды · хранение −20 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Цианокобаламин (B₁₂) | 1,0 мг (или 1 мл первичного р-ра 0,1 г/л) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Приготовление
Полностью повторяет порядок BBM (кальций — последним), затем среду автоклавируют, охлаждают до комнатной температуры и только после этого вносят по 1 мл стерильно профильтрованных растворов витаминов.
Примечания
- Витамины НИКОГДА не автоклавируют вместе со средой: тиамин при 121 °C разрушается на 40–70 %, что делает среду бесполезной именно для тех ауксотрофов, ради которых она готовится.
- Итоговые концентрации витаминов в среде: тиамин·HCl — 0,012 мг/л, цианокобаламин — 0,01 мг/л.
- Растворы витаминов хранят при −20 °C аликвотами по 1–2 мл; срок годности 6 месяцев, повторное замораживание недопустимо.
- Щёлочь вносят первой: в нейтральной воде ЭДТА растворяется крайне медленно. Раствор хранят отдельно от раствора железа — при смешивании концентратов выпадает осадок.
- Серная кислота выполняет роль консерванта: без неё Fe²⁺ быстро окисляется до Fe³⁺ и выпадает в виде гидроксида. Появление ржавой мути — признак негодности, раствор обновляют каждые 2–3 месяца.
- В прописи Болда бор вынесен из общего раствора микроэлементов в отдельный раствор из-за высокой концентрации. Растворяется медленно — подогреть до 40 °C.
- Триоксид молибдена MoO₃ в воде практически нерастворим — его предварительно растворяют в 0,1 мл 1 М NaOH. При эквимолярной замене на Na₂MoO₄·2H₂O этот шаг не нужен.
- Первичный раствор тиамина: 12 мг на 100 мл; из него берут 1 мл. Итоговая концентрация в среде — 0,012 мг/л. Стерилизация только фильтрацией (0,22 мкм).
- Первичный раствор B₁₂: 10 мг на 100 мл; из него берут 1 мл. Итоговая концентрация в среде — 0,01 мг/л. Два раствора витаминов готовят и хранят раздельно.